将细胞与液体物质分离开后,若重组蛋白质是在细胞内表达,必须先将它们从胞内释放到周围环境中去,然后进行目的产物的纯化。因此,细胞的破碎操作对胞内蛋白质的分离纯化是非常重要的。 细胞破碎是指用物理、化学、酶溶等方法来破坏细胞壁或细胞膜,从而将胞内物质释放至周围环境的过程。常见的细胞破碎方法有变性剂裂解法、超声破碎法、机械破碎法、酶溶法和反复冻融法等。 (1)变性剂裂解法。哺乳动物细胞没有坚硬的细胞壁,因此破碎细胞的条件相对温和,在破碎缓冲液中加入变性剂就可使细胞破裂。常见的变性剂有盐酸胍、脲、SDS和NP-4...【查看原文】