PFKL促进脂滴/线粒体偶联的脂解过程

第一步，脂滴中确定目标蛋白分子

质谱检测和分析，结果发现和脂滴相互作用的线粒体外膜蛋白CPT1A（图1a）。该蛋白负责催化长链脂肪酸辅酶a (CoA)，将酰基限速转移到肉碱上，可能是参与线粒体偶联脂滴的重要分子。

第二步，确定PLIN2与CPT1A相互作用及其对脂滴/线粒体偶联的影响

内源Co-IP实验显示，脂滴包被蛋白PLIN2与CPT1A结合（图1b-c）。活细胞成像分析显示，在葡萄糖剥夺时，CPT1A相关的线粒体被招募到PLIN2包被的脂滴上（图1d）。敲减CPT1A阻断了脂滴与线粒体之间的欧联，同时葡萄糖剥夺的总脂滴增加（图1e-f）。这些结果表明PLIN2和CPT1A的相互作用对脂滴与线粒体的结合以及随后的脂滴水解至关重要。

第三步，葡萄糖剥夺，增强了PFKL与PLIN2结合，这对PLIN2和CPT1A互作、脂滴/线粒体的偶联、脂滴脂解至关重要。

Co-IP分析发现，使用糖酵解代谢物处理葡萄糖剥夺的细胞不影响PLIN2与CPT1A的结合（图1g），表明葡萄糖剥夺诱导的PLIN2和CPT1A互作与糖酵解代谢产物无关。

脂滴提取物质谱分析显示PFKL是一种脂滴相关蛋白（图1a），在HCC中高表达。Co-IP实验发现，葡萄糖剥夺增强PFKL与PLIN2结合（图1h）。免疫荧光显示葡萄糖剥夺后PFKL与PLIN2共定位（图1i）。IP-WB检测显示PFKL在葡萄糖缺乏条件下与脂滴结合（图1j）。表明葡萄糖剥夺诱导PFKL与脂滴上的PLIN2结合。

另外，Co-IP分析提示，敲减PFKL抑制了葡萄糖剥夺诱导的PLIN2与CPT1A互作（图1k）、脂滴和线粒体之间的系结（图1l）以及总脂滴的减少（图1m）。

更多详细内容分享请查阅：【《Nature Metabolism》解读：生命的道口开关怎么控制？糖酵解or氧化脂解？六边形战士PFKL脂解促癌！】

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