脑声常谈：小鼠大脑中动脉短暂栓塞模型（t-MCAO）

采用小鼠短暂性大脑中动脉闭塞（t-MCAO）模型模拟脑缺血再灌注损伤。

t-MCAO模型建立

（1）将小鼠称重后,腹膜下注射3.5%水合氯醛麻醉小鼠（1mL/100g）。在实验中，腹腔注射要注意避免破坏腹腔内其他脏器，麻药使用量根据每只小鼠的个体差异，调整麻药用药量。

（2）待小鼠麻醉后，小鼠头盖骨部分用1%碘伏进行消毒后剃毛，沿中线剪开小鼠头盖骨处皮肤，用15%双氧水去除硬骨膜后固定脑血流仪探头。

（3）插栓过程：

①将小鼠使用3M抗过敏胶带将其四肢和牙齿固定在泡沫板上（配保温垫，维持小鼠体温，稳定生命体征），为防小鼠窒息，拉出舌头保持呼吸道通畅。

②1%碘伏溶液消毒小鼠颈部，备皮干净，用剪刀在皮肤正中剪约2cm切口。在光学显微镜下使用无菌镊子钝性分离颈部周围肌肉和筋膜，暴露左侧颈总动脉后根据解剖结构，找出并分离颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉，避开且分离迷走神经，防止破坏迷走神经，失去呼吸导致小鼠死亡；

③准备三根长度约为1cm的外科缝线（将缝线抽出单股线，浸泡在生理盐水中备用），将第一根扎死结在颈总动脉（尽量远离分叉处给后续血管剪口留出操作空间），第二根扎死结在颈外动脉（注意尽量靠近分叉处，方便后续插栓），第三根扎活结在颈总动脉分叉处（注意所扎的活结不要太松）。把每个缝线扎结后的余线理清楚，防止后续实验小鼠血液从血管流出后，看不清楚线结的位置，导致实验失败;

④将提前准备好小鼠动脉夹轻轻夹在小鼠颈内动脉上，在小鼠颈总动脉上用小号眼科剪，弯头冲下沿45°角剪合适大小切口，过程中会有少部分血液流出，可用干燥棉球清洁干净，另外注意动脉切口不易过大或过小，防止实验中动脉断裂或线栓无法插入;

⑤选取外径为0.17-0.19mm的线栓，显微镜下用弯镊夹住线栓对准上一步剪好的颈总切口缓缓推入，过程中注意若将线栓误推入颈外，则慢慢将线栓退后，但不要完全退出，调整角度，重新插入颈内反向。确定无误后，将动脉夹取下，继续插入;

⑥线栓上黑色标记通过颈总分叉处后，注在多普勒血流仪上观察血流降低到基础血流值的30％或以下时，停止插栓。

⑦将之前预留在总动脉分叉处上活结系紧以固定所插入的线栓，将之前剥离的小鼠颈部肌肉还原，伤口覆盖浸润生理盐水的棉球（其后注意棉球湿润程度，防止黏住伤口），静置小鼠在保温垫上，期间注意小鼠呼吸和心跳。计时缺血60分钟后，将生理盐水棉球去除，肌肉和粘膜重新分离，轻轻打开之前预留的颈总分叉处活结，轻轻拔出线栓（注意观察线栓硅胶头形状用以初步判断是否插栓成功），将活结系紧，生理盐水棉球清洁创口，过程中持续观察多普勒血流仪。

⑧按解剖结构将小鼠颈部肌肉及筋膜，用干燥的缝线缝合颈部手术伤口，1%碘伏进行消毒。按照编号分笼老鼠（保证鼠有足够自由的生存空间，防止术后苏醒互相踩踏致死），饲养在室温22-25℃条件下，提供饮水及泡过水的软食，再灌注24小时后观察。⑨Sham组操作：除插入线栓外其余操作与后续饲养条件与建模组一致;

模型建立成功的标准小鼠t-MCAO模型建立24小时后，按以下方法进行神经功能学评分。

 t-MCAO模型排除标准

（1）小鼠Longa评分为0分；（2）小鼠死亡;（3）小鼠Longa评分1-4分，但有蛛网膜下腔或颅底出血情况;有（1）至（3）其中任一的的实验动物皆舍弃计数。

动物行为学实验（拉力试验）

（1）在25℃，安静的条件下，由一人操作提小鼠尾巴将其放置于金属抓竿的上方，使小鼠的前肢或四肢自然用力抓住金属抓杆。（2）抓住小鼠尾部，均匀用力，向后直线拉拽（注意每次拉拽用力角度及力度保持一致），直到小鼠的肢体离开金属抓竿。（3）重复三次测量完成所有实验组和对照组数据后统计分析。（4）在实验前训练每只小鼠三次。

根据神经功能缺损评分标准，WT Sham组与C3aR-/-Sham组两组小鼠得分为0分，即为正常状态；WTt-MCAO组和C3aR-/-t-MCAO组表现为神经功能缺损评分有所增加，说明WTt-MCAO组和C3aR-/-t-MCAO组的小鼠神经功能受损严重；但C3aR-/-t-MCAO组的小鼠相较于WTt-MCAO的小鼠神经功能缺损评分有所改善；说明敲除C3aR后的小鼠，神经功能缺损有所减轻，结果表明C3aR敲除可以有效地减轻t-MCAO后小鼠的神经功能损伤。