小鼠胰岛分离纯化

原理：通过胶原酶消化法分离小鼠胰腺中的胰岛。胶原酶的作用是分解胰腺的结缔组织，从而释放胰岛细胞。利用口吸管在体视显微镜下挑取形态完整的胰岛。该方法操作简单、重复性好，每只小鼠可获得50～100枚胰岛，细胞成活率达到95%以上。

操作步骤

麻醉： 腹腔注射阿佛丁麻醉小鼠

解剖： 腹部消毒，打开腹部暴露胆管和胰管；用止血钳夹住胆管和十二指肠连接处白色壶腹部位。

弯针： 如图所示，将30G显微注射直针针头用平口镊子折弯，方便注射。

注射： 用2ml注射器吸取1.2ml胶原酶溶液，然后针头换成30G显微注射弯针，在体视镜下注入胆总管，直至观察到胰腺膨大充盈。

放血： 打开胸腔心脏放血或断头放血。

解离： 用镊子和剪刀快速取下胰腺组织并转移到50ml离心管中解离。

消化： 在37°C下消化19分钟，孵育期间手动摇匀离心管3次, 直至看见均质化的胰腺混悬液。

离心： 上下剧烈摇动离心管10s左右，4℃, 290 g离心30 s, 弃上清留沉淀；如此重复2次。

小筛：离心管中加入15ml 溶液重悬沉淀，把重悬溶液转移到另外1个套有孔径100μm细胞筛的50ml离心管，如此重复3次。

大筛：取一大培养皿，100μm细胞筛扣在大培养皿中，（胰岛较大，无法通过筛网）用1000μl移液枪吸取溶液冲洗细胞筛上的胰岛。

挑选：把含有胰岛的大培养皿转移到体视镜下进行单个的胰岛挑选。

问题解决

1． 麻醉不足：增加阿佛丁剂量或等待更长时间。

2． 胰腺不膨胀：检查胶原酶活性或注射技术。

3． 胰岛损失：优化筛选过程，小心操作。

3． 1ml-1.2ml胶原酶溶液就可使小鼠胰腺膨大充盈，故注射过程中少量损失不影响最终结果。

4． 根据实验需要选用放血方式，血液对胶原酶消化影响很大，故放血后观察胰腺仍为白色没有回血发红为佳。

技术支持：

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请严格遵守操作步骤，以确保实验结果的准确性和重复性。不当的操作可能导致实验失败或数据偏差。