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Image J定量分析免疫组化图步骤

Step 1

打开Image J软件，点击【File】-【Open】

从文件夹中选择打开待分析的图片。

Step 2

选择【Image】-【Type】-【选择“RGB stack”】，图片由彩图变为黑白图。

Step 3

【调节对比度】—【调节图片最下方的滑轮，调节对比度（一般调节到中间或最右侧）】

Step 4：菜单栏选择【Image】-【Adjust】-【Threshold】

Step 5

将如下图红框位置中【Default】中选为【“Red”】

用滑轮选择阳性信号区域。

Step 6

点击【Set】-【OK】

Step 7

菜单栏点击【Analyze】-【Set measurements】

接着选定如下所需参数，选择完参数之后点击【OK】

Step 8

菜单栏选择【Analyze】-【Measure】

面积和面积比就出来了，包括累积光密度值IntDen（Integratedoption density，IOD）。IOD值与目的蛋白的总量成正比，IOD值除以目的蛋白分布区域面积（IntDen/Area），得到平均光密度值。AOD（AverageOptical Density），通过AOD值作统计图，即可比较蛋白表达量的差异。

公式：AOD（%Area）=IOD/Area

% Area即为我们所需的结果。

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