1-8000种蛋白都可以检测：Elisa、Ella、luminex、Olink、固相蛋白芯片对比总结

作者：科研根号三发布时间：2024-10-14

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想做蛋白检测却苦于方法太多分不清，到底应该怎么选呢？

1-8000种蛋白，都有适合的检测方法！这篇文章就为大家分享几种常见的蛋白检测技术~

如上所有实验技术，老三皆可提供相应的实验服务。老师仅需寄送合格的蛋白样本，小赛完成所有的实验操作、上机分析以及数据整理。

实验服务流程：

一、ELISA（酶联免疫吸附实验）

1）原理

已知的抗体或抗原吸附在固相载体上，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的一项免疫检测技术，可对抗原或者抗体进行定性或者定量测定。

2）方法特点

优势：

高特异性、高灵敏度、操作简便、不需要复杂仪器设备，重复性好、结果稳定可靠。

适合：

检测指标单一、样本数量较多、种属和样本类型多样。

二、Ella（多因子免疫检测平台）

1）原理

Ella基于微流控免疫检测技术，将特异性捕获抗体包被在微流体玻璃反应管（Glass Nano Reactor，GNR）中，然后将GNR嵌入全自动微流体免疫检测管。每个检测通道都含有三个包被有捕获抗体的 GNR，因此每个样本都会自动输出三个读值。

它能够自动取样、洗涤，采用双抗体夹心，利用生物素-链霉亲和素进行信号放大，最后通过检测器获取640nm的荧光信号并自动输出三个平行GNR的数据及均值。

2）方法特点

优势：

亚皮克级灵敏度：采用微体积反应管和高质量ELISA抗体对，更适合检测低表达丰度蛋白。

极佳实验重复性：全程自动完成，所有免疫学反应都发生在卡盒微流通道内，消除人工操作的误差，数据结果超低CV值、高重复性，利于大样本量平行对比和临床样本长时间动态监测。

1.5h出结果、全自动化：与传统ELISA 3-6 h相比，1.5h得到精准数据，加快实验数据周转速度。

三、Luminex（液相蛋白芯片检测）

1）原理

Luminex液相芯片系统是基于Luminex xMAP技术的检测系统。该技术的核心是把直径为5.6um的聚苯乙烯小球用荧光染色的方法进行编码，通过调节两种荧光染料的不同配比获得最多可达百种具有不同特征荧光谱的微球，然后将每种编码微球共价交联上针对特定检测物的抗原、抗体或核酸探针等捕获分子。

应用时，先把针对不同检测物的编码微球混合，再加入微量待检样本，在悬液中靶分子与微球表面交联的捕获分子发生特异性结合，在一个反应孔内可以同时完成多达100种不同的检测反应。最后用Luminex检测分析，仪器通过两束激光分别识别微球的编码和检测微球上报告分子的荧光强度。

2）方法特点

优势：

多：检测指标多（>350种靶标)、引用文献多、应用领域广。

快：实验周期快、1周内出结果。

好：灵敏度高（pg/ml）、检测范围宽（1-10,000pg/ml）、重复性好（CV值<15%）、个性化（指标可任意组合）。

省：省样本（20μl微量标本）、省时间、省成本。

四、Olink

1）原理

Olink采用具有独立知识产权的PEA（proximity extension assay，邻位延伸分析技术）。带有特有的核苷酸序列探针的一对抗体与被检测蛋白特异性结合后，正确且邻位探针通过末端5bp配对碱基互补结合，在延伸酶的作用下形成双链模板，利用qPCR或NGS进行检测，通过特异性的核苷酸序列信号来反应检测蛋白质的含量。

2）方法特点

PEA技术

高灵敏度（fg/ml），高特异性（可识别相似度90%的同源蛋白）；

极少样本需求量

1ul样本检测48,92,384种蛋白；

高通量检测

单次检测可分析88个样本48,92,147,384,456个蛋白检测点；

可灵活扩展

同时检测21种至384种蛋白，最多可检测3072种蛋白；

严谨的内置质量控制

4个内部对照、8个外部对照；

严格遵循监管要求

遵循FDA的流程要求，数据可直接用于FDA申请；

与其他金标准方法的高度一致性

五、固相蛋白芯片

1）原理

蛋白芯片是一种高通量的蛋白质免疫检测分析技术，一次试验可以检测几百、上千种目标因子，且只需极少的样本量。

芯片是将多种不同的捕获抗体印制在固相支持物上，每种抗体孤立成点，抗体之间不相互影响，呈方阵排列。捕获抗体固定在固相支持物上以后，用封闭液进行封闭空余位点，然后将生物样品和芯片一起孵育，样品中特异性的抗原与捕获抗体偶联，偶联到捕获抗体上的抗原再与生物素标记的检测抗体一起孵育，最后通过荧光剂-链霉亲和素或者HRP-链霉亲和素及化学发光试剂进行荧光染色剂检测或者化学发光信号检测，得到芯片结果图片，通过软件提取图片灰度值，得到芯片数据，根据数据来比较目标因子信号差异和定量检测目标因子含量。